癌胚抗原單克隆抗體（CEA mAb）

心肌肌鈣蛋白 I 單克隆抗體（TroponinI mAb）

肌紅蛋白單克隆抗體（Myoglobin mAb）

肌酸激酶同功酶單克隆抗體（CK-MB mAb）

降鈣素原單克隆抗體（PCT mAb）

C反應(yīng)蛋白單克隆抗體（CRP mAb）

癌胚抗原單克隆抗體（CEA mAb）

甲胎蛋白單克隆抗體（AFP mAb）

人血紅蛋白單克隆抗體（Hb mAb）

轉(zhuǎn)鐵蛋白單克隆抗體（TRF mAb）

前列腺特異抗原單克隆抗體（PSA mAb）

1. 直接免疫熒光法測抗原
⑴基本原理
將熒光素標(biāo)記在相應(yīng)的抗體上，直接與相應(yīng)抗原反應(yīng)。其優(yōu)點是方法簡便、特異性高，非特異性熒光染色少。缺點是敏感性偏低；而且每檢查一種抗原就需要制備一種熒光抗體。此法常用于細(xì)菌、病毒等微生物的快速檢查和腎炎活檢、皮膚活檢的免疫病理檢查。
⑵試劑與儀器
磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）：0.01mol/L，pH7.4
熒光標(biāo)記的抗體溶液：以0.01mol/L，pH7.4的PBS進(jìn)行稀釋
緩沖甘油：分析純無熒光的甘油9份+ pH9.2 0.2M碳酸鹽緩沖液1份配制
搪瓷桶三只（內(nèi)有0.01mol/L，pH7.4的PBS 1500ml）
有蓋搪瓷盒一只（內(nèi)鋪一層浸濕的紗布墊）熒光顯微鏡玻片架濾紙37℃溫箱等。
⑶實驗步驟
① 滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上，10min后棄去，使標(biāo)本保持一定濕度。
② 滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液，使其*覆蓋標(biāo)本，置于有蓋搪瓷盒內(nèi)，保溫一定時間（參考：30min）。
③ 取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS沖洗后，再按順序過0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸3-5 min，不時振蕩。
④ 取出玻片，用濾紙吸去多余水分，但不使標(biāo)本干燥，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋。
⑤ 立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標(biāo)本的特異性熒光強(qiáng)度，一般可用“+”表示：
（-）無熒光；（±）極弱的可疑熒光；（+）熒光較弱，但清楚可見；（++）熒光明亮；（+++ --++++）熒光閃亮。待檢標(biāo)本特異性熒光染色強(qiáng)度達(dá)“++”以上，而各種對照顯示為（±）或（-），即可判定為陽性。
⑷注意事項
1）對熒光標(biāo)記的抗體的稀釋，要保證抗體的蛋白有一定的濃度，一般稀釋度不應(yīng)超過1：20，抗體濃度過低，會導(dǎo)致產(chǎn)生的熒光過弱，影響結(jié)果的觀察。
2）染色的溫度和時間需要根據(jù)各種不同的標(biāo)本及抗原而變化，染色時間可以從10 min到數(shù)小時，一般30 min已足夠。染色溫度多采用室溫（25℃左右），高于37℃可加強(qiáng)染色效果，但對不耐熱的抗原（如流行性乙型腦炎病毒）可采用0-2℃的低溫，延長染色時間。低溫染色較37℃30 min效果好的多。
3）為了保證熒光染色的正確性，首次試驗時需設(shè)置下述對照，以排除某些非特異性熒光染色的干擾。
① 標(biāo)本自發(fā)熒光對照：標(biāo)本加1-2滴0.01mol/L，pH7.4的PBS。
② 特異性對照（抑制試驗）：標(biāo)本加未標(biāo)記的特異性抗體，再加熒光標(biāo)記的特異性抗體。
③ 陽性對照：已知的陽性標(biāo)本加熒光標(biāo)記的特異性抗體。
如果標(biāo)本自發(fā)熒光對照和特異性對照呈無熒光或弱熒光，陽性對照和待檢標(biāo)本呈強(qiáng)熒光，則為特異性陽性染色。
4）一般標(biāo)本在高壓汞燈下照射超過3min，就有熒光減弱現(xiàn)象，經(jīng)熒光染色的標(biāo)本在當(dāng)天觀察，隨著時間的延長，熒光強(qiáng)度會逐漸下降。

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